一、初識(shí)生物安全柜
生物安全柜可提供樣品和工作人員的雙重保護(hù)。過濾后的潔凈氣流從安全柜頂部吹下，通過工作區(qū)域，在到工作人員的呼吸區(qū)域前被俘獲。氣流在放空前將被過濾，一般情況下過濾后的空氣將被排回實(shí)驗(yàn)室或者通過排氣管道排出室外。

各生物安全等級(jí)適用的生物安全柜

生物安全柜可分為一級(jí)、二級(jí)和三級(jí)三大類以滿足不同的生物研究和防疫要求。一級(jí)生物安全柜可保護(hù)工作人員和環(huán)境而不保護(hù)樣品。氣流原理和實(shí)驗(yàn)室通風(fēng)櫥一樣，不同之處在于排氣口安裝有HEPA 過濾器。所有類型的生物安全柜都在排氣和進(jìn)氣口使用HEPA 過濾器。一級(jí)生物安全柜本身無風(fēng)機(jī)，依賴外接通風(fēng)管中的風(fēng)機(jī)帶動(dòng)氣流，由于不能保護(hù)柜內(nèi)產(chǎn)品，目前已較少使用。二級(jí)生物安全柜是目前應(yīng)用最為廣泛的柜型。按照NSF49 的中的規(guī)定，二級(jí)生物安全柜依照入口氣流風(fēng)速、排氣方式和循環(huán)方式可分為4 個(gè)級(jí)別：A1 型，A2 型(原B3 型),B1 型和B2 型。所有的二級(jí)生物安全柜都可提供工作人員、環(huán)境和產(chǎn)品的保護(hù)。A1 型安全柜前窗氣流速度最小量或測(cè)量平均值應(yīng)至少為0.38m/s。70%氣體通過HEPA 過濾器再循環(huán)至工作區(qū)，30%的氣體通過排氣口過濾排除。A2 型安全柜前窗氣流速度最小量或測(cè)量平均值應(yīng)至少為0.5m/s。70%氣體通過HEPA 過濾器再循環(huán)至工作區(qū)，30%的氣體通過排氣口過濾排除。二級(jí)B 型生物安全柜均為連接排氣系統(tǒng)的安全柜。連接安全柜排氣導(dǎo)管的風(fēng)機(jī)連接緊急供應(yīng)電源，目的在斷電下仍可保持安全柜負(fù)壓，以免危險(xiǎn)氣體泄漏如實(shí)驗(yàn)室。其前窗氣流速度最小量或測(cè)量平均值應(yīng)至少為0.5m/s(100fpm)。B1 型70%氣體通過排氣口HEPA 過濾器排除，30%的氣體通過供氣口HEPA 過濾器再循環(huán)至工作區(qū)。B2 型為100%全排型安全柜，無內(nèi)部循環(huán)氣流，可同時(shí)提供生物性和化學(xué)性的安全控制。三級(jí)生物安全柜是為4 級(jí)實(shí)驗(yàn)室生物安全等級(jí)而設(shè)計(jì)的，柜體完全氣密，工作人員通過連接在柜體的手套進(jìn)行操作，俗稱手套箱(Golve box)，試驗(yàn)品通過雙門的傳遞箱進(jìn)出安全柜以確保不受污染，適用于高風(fēng)險(xiǎn)的生物試驗(yàn)。

二、生物安全柜的國(guó)際認(rèn)證標(biāo)準(zhǔn)
目前世界上最通用的生物安全柜國(guó)際認(rèn)證是美國(guó)的NSF/ANSI 49 和歐盟的EN12469，這兩種標(biāo)準(zhǔn)對(duì)安全柜性能分級(jí)、安全性能檢測(cè)都有詳細(xì)的說明和要求。安全柜標(biāo)準(zhǔn)對(duì)規(guī)范安全柜市場(chǎng)，保護(hù)研究人員起到重要的作用。

1.美國(guó)NSF 標(biāo)準(zhǔn)："Class II (laminar flow) Biosafety Cabinetry" NSF/ANSI 49, Ann. Arbor,MI.US.,2002.
2.歐盟EN 標(biāo)準(zhǔn)："Biotechnology－Performance criteria for microbiological safetycabinets" .EN12469，CEN/CENELEC, BSI,2000.

三、生物安全等級(jí)簡(jiǎn)介

生物安全等級(jí)P1
進(jìn)行試驗(yàn)研究用的物質(zhì)都是已知的,所有特性都已清楚并且已證明不會(huì)導(dǎo)致疾病的多種微生物物質(zhì)。研究通過日常的程序在公開的實(shí)驗(yàn)臺(tái)面上進(jìn)行。不需要有特殊需求的安全保護(hù)措施。操作人員只需經(jīng)過基本的實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)程序培訓(xùn)并且通常由科研人員指導(dǎo)，在這樣的環(huán)境下并不需要生物安全柜的存在。
生物安全等級(jí)P2
進(jìn)行試驗(yàn)研究用的物質(zhì)是一些已知的中等程度危險(xiǎn)性的并且與人類某些常見疾病相關(guān)的物質(zhì)。操作者必須經(jīng)過進(jìn)行相關(guān)研究的操作培訓(xùn)并且由專業(yè)科研人員指導(dǎo)。對(duì)于易于污染的物質(zhì)或者可能產(chǎn)生污染的情況進(jìn)行預(yù)先的處理準(zhǔn)備。一些可能涉及或者產(chǎn)生有害生物物質(zhì)的操作過程都應(yīng)該在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行，在這些條件下最好使用二級(jí)的生物安全柜。
生物安全等級(jí)P3
進(jìn)行試驗(yàn)研究的物質(zhì)一般都是本土或者外來的有通過呼吸傳染使人們致病或者有生命危險(xiǎn)的可能的物質(zhì)。我們需要保護(hù)一切在周圍環(huán)境中等操作者免于暴露于這些有潛在危險(xiǎn)的物質(zhì)中。通常使用二級(jí)或者三級(jí)的生物安全柜是必需的。
生物安全等級(jí)P4
進(jìn)行試驗(yàn)研究的物質(zhì)是一些非常高危險(xiǎn)性并且可以致命的有毒物質(zhì)，可以通過空氣傳播并且現(xiàn)今并沒有有效的疫苗或者治療方法來處理。操作者必須經(jīng)過熟練的關(guān)于進(jìn)行這種非常高危險(xiǎn)性物質(zhì)研究的培訓(xùn)，并且應(yīng)該很熟悉一些相關(guān)操作，保護(hù)設(shè)施，實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)等等方面對(duì)于這些高危險(xiǎn)性物質(zhì)的預(yù)防。同時(shí)也必須由在此研究領(lǐng)域非常有經(jīng)驗(yàn)的科研人員進(jìn)行指導(dǎo)。對(duì)于實(shí)驗(yàn)室的進(jìn)出應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格的進(jìn)行控制，實(shí)驗(yàn)室一定要單獨(dú)的建造或者建造在一棟大樓中于其他任何地方都分離開的獨(dú)立房間內(nèi)，并且要求有詳細(xì)的關(guān)于研究的操作手冊(cè)進(jìn)行參考。在這樣的實(shí)驗(yàn)研究中三級(jí)的生物安全柜是必需的。
四、如何選擇生物安全柜
Q：我需要購買的是生物安全柜還是超凈工作臺(tái)
A：超凈工作臺(tái)提供的是對(duì)樣品的保護(hù)，對(duì)操作者和環(huán)境是不提供保護(hù)的；廣義上的生物安全柜同時(shí)提供對(duì)操作者、環(huán)境和樣品的保護(hù)。所以，從您需要的保護(hù)情況上，可以得出正確的選擇；
Q：我應(yīng)該購買哪種類型、防護(hù)級(jí)別的生物安全柜

A：一般來說，除非需要做一些未知菌種和病毒和活體的研究需要使用三級(jí)生物安全柜，二級(jí)生物安全柜已經(jīng)能基本滿足我們的正常工作需要。對(duì)于不含有毒、放射性、揮發(fā)刺激性溶劑的樣品的實(shí)驗(yàn)，A/B3 型生物安全柜就已經(jīng)滿足使用要求，對(duì)于醫(yī)院系統(tǒng)采購，因?yàn)椴《炯熬N類別較復(fù)雜，而且實(shí)驗(yàn)條件變化大，建議使用B2 全排型生物安全柜；
Q：如何評(píng)判一臺(tái)生物安全柜的好壞
A：生物安全柜主要是用來做生物危害性防護(hù)的，所以對(duì)操作者的保護(hù)考慮是評(píng)判產(chǎn)品好壞的主要依據(jù)。二級(jí)生物安全柜最核心的技術(shù)是濾膜（包含濾膜材質(zhì)、濾膜截留效率、濾膜壽命）、風(fēng)路設(shè)計(jì)（包括前操作面的平衡、沉降風(fēng)速以及風(fēng)速的均一性、進(jìn)氣風(fēng)速、風(fēng)的垂直沉降形態(tài)）、報(bào)警設(shè)置（好的生物安全柜應(yīng)該包含低風(fēng)速報(bào)警、前窗錯(cuò)誤位置的報(bào)警、紫外連鎖裝置、B2 全排機(jī)型還需要有外風(fēng)機(jī)連鎖裝置）和負(fù)壓保護(hù)（包含側(cè)壁負(fù)壓，背部負(fù)壓、頂部負(fù)壓）。所以通過上述指標(biāo)的比較可以知道生物安全柜的優(yōu)劣；
Q：為什么前操作面的平衡是一臺(tái)生物安全柜的重要指標(biāo)
A：二級(jí)生物安全柜都存在一個(gè)開口的前操作面，便于操作的同時(shí)也帶來一個(gè)污染的可能，如果平衡不好，那么會(huì)產(chǎn)生這個(gè)區(qū)域的污染，就無法做到正常的避免外界進(jìn)入操作室污染樣品以及操作室外泄污染操作者防護(hù)，這樣就和生物安全柜的設(shè)計(jì)理念出現(xiàn)了本質(zhì)的偏差，所以說，二級(jí)生物安全柜在前操作面的平衡問題很關(guān)鍵；
Q：為什么報(bào)警裝置里面需要有低風(fēng)速報(bào)警一個(gè)內(nèi)容
A：在歐美地區(qū)，按照歐美的標(biāo)準(zhǔn)，每一臺(tái)生物安全柜都推薦做一次主要技術(shù)指標(biāo)的校檢。我們買回生物安全柜并使用一段時(shí)候以后，生物安全柜是否還處于對(duì)操作者、環(huán)境和樣品的正常保護(hù)，作為操作使用人員，我們是沒有辦法知道的，而一旦由于濾膜堆積而造成沉降風(fēng)速降低，就會(huì)產(chǎn)生樣品污染可能，如果進(jìn)風(fēng)風(fēng)速降低，那么就可能造成人員被污染。在現(xiàn)有的國(guó)情下，我們很難做到每年的技術(shù)校檢，因?yàn)榇嬖诓恍〉馁M(fèi)用，所以低風(fēng)速報(bào)警很重要；
Q：生物安全柜具有電動(dòng)前窗，是不是很方便，很好
A：錯(cuò)！在歐美地區(qū)，一個(gè)生物危害性實(shí)驗(yàn)室往往需要配置雙供電系統(tǒng)，避免一個(gè)供電系統(tǒng)出現(xiàn)故障時(shí)的生物危害性物質(zhì)外泄。在國(guó)內(nèi)，這樣的實(shí)驗(yàn)室配置很難獲得。所以電動(dòng)前窗一旦在實(shí)驗(yàn)過程中停電，就會(huì)產(chǎn)生很大的危險(xiǎn)，造成無法彌補(bǔ)的損失！而且不論是電動(dòng)前窗還是手動(dòng)前窗，在操作時(shí)都是固定高度的，所以在生物安全柜上，電動(dòng)前窗意義不大并有危險(xiǎn)，可以說百害無一益；
Q：生物安全柜的側(cè)壁負(fù)壓是什么意思
A：生物安全柜歐美標(biāo)準(zhǔn)不同，在側(cè)壁要求也不同，美洲產(chǎn)品都是不銹鋼側(cè)壁，并要求負(fù)壓腔來避免側(cè)壁泄漏污染可能，歐洲產(chǎn)品基本都采用玻璃側(cè)壁，沒有對(duì)側(cè)壁做負(fù)壓保護(hù)。由于柜體內(nèi)部操作室是正壓的，所以如果有殼體破損和泄漏點(diǎn)存在，就會(huì)產(chǎn)生向外的泄漏。因此在側(cè)壁和背板形成負(fù)壓保護(hù)可以有效降低泄漏的可能性；
Q：負(fù)壓保護(hù)腔如何來避免污染和交叉污染
A：好的設(shè)計(jì)會(huì)在結(jié)束工作后風(fēng)機(jī)可以進(jìn)一步進(jìn)行一段時(shí)間的空轉(zhuǎn)來潔凈消毒，如果沒有這個(gè)設(shè)計(jì)，操作者需要在實(shí)驗(yàn)操作結(jié)束后，將柜體繼續(xù)開啟一定時(shí)間以最大程度排出污染物。
Q：我們需要定購一些什么附件
A：柜內(nèi)一般會(huì)需要使用一些用電設(shè)備，那么柜內(nèi)的防濺電源插座是需要的，而且由于目前國(guó)內(nèi)使用歐洲儀器比較普及，鑒于歐洲電源線的接地和我國(guó)的插座不相容，所以會(huì)在歐式儀器上產(chǎn)生一定的靜電，靜電會(huì)影響到生物安全柜內(nèi)垂直沉降的風(fēng)流，會(huì)有一定吸附作用，因此如果可能最好配置一個(gè)歐式防濺電源插座。由于柜體操作室內(nèi)部污染不是很大，最大的污染在負(fù)壓保護(hù)腔內(nèi)，所以紫外燈系統(tǒng)可以考慮選配，來達(dá)到更好的滅菌消毒功能。分體設(shè)計(jì)的安全柜需要配支架；

五、生物安全柜柜內(nèi)操作主要注意事項(xiàng)
1、緩慢移動(dòng)原則：為了避免影響正常的風(fēng)路狀態(tài)，柜內(nèi)操作時(shí)手應(yīng)該盡量平緩移動(dòng)
2、物品平行擺放原則：為了避免物品和物品之間的交叉污染現(xiàn)象產(chǎn)生，在柜內(nèi)擺放的物品應(yīng)該盡量呈橫向一字?jǐn)[開，避免回風(fēng)過程中造成交叉污染。同時(shí)避免堵塞背部回風(fēng)隔柵影響正常風(fēng)路
3、避免震動(dòng)原則：柜內(nèi)盡量避免震動(dòng)儀器（例如離心機(jī)、旋渦振蕩器等）的使用，因?yàn)檎饎?dòng)會(huì)使得積留在濾膜上的顆粒物質(zhì)抖落，導(dǎo)致操作室內(nèi)部潔凈度降低，同時(shí)如果在前操作面平衡失敗還會(huì)引起安全柜對(duì)操作者的污染
4、不同樣品柜內(nèi)移動(dòng)原則：柜內(nèi)兩種及以上物品需要移動(dòng)時(shí)，一定遵循低污染性物品向高污染性物品移動(dòng)原則，避免污染性高的物品在移動(dòng)過程中產(chǎn)生對(duì)柜體內(nèi)部的大面積污染

5、明火使用原則：柜內(nèi)盡量不要使用明火！因?yàn)樵诿骰鹗褂眠^程中產(chǎn)生的細(xì)小顆粒雜質(zhì)將被帶入濾膜區(qū)域，這些高溫雜質(zhì)會(huì)損傷濾膜。無法避免一定需要使用的時(shí)候，宜使用低火苗的本生燈