百迪人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基（替代E8）490ml+10ml
- 品名： 百迪人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基（替代E8）490ml+10ml
- 型號(hào)： S100-500
- 產(chǎn)品詳情
- 規(guī)格參數(shù)
產(chǎn)品信息
| 適用范圍 | 試劑 |
|---|---|
| 使用方法 | 人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基制備： 1. 將人多能干細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基提前恢復(fù)至室溫，添加劑解凍后翻轉(zhuǎn)混勻。 2. 然后將 10ml 添加劑無(wú)菌轉(zhuǎn)移到 490ml 人多能干細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基，混勻得到完全培養(yǎng)基。 3. 配制好的完全培養(yǎng)基可在 2°C-8°C 下儲(chǔ)存 2 周。 人多能干細(xì)胞復(fù)蘇： 1. 提前用基質(zhì)膠包被 6 孔板，每孔內(nèi)加入 1ml 基質(zhì)膠輕輕晃動(dòng)使其完全覆蓋皿底，置于 37℃培養(yǎng)箱中孵育 1h~2h，實(shí)驗(yàn)前拿出并置于生物安全柜中室溫下平衡 20 min。 2. 將多能干細(xì)胞完全培養(yǎng)基提前預(yù)熱，取 5~10ml 加入 15ml 離心管中備用。 3. 將凍存的多能干細(xì)胞從液氮中取出，37°C 水浴中快速融化，當(dāng)只剩下一塊小冰晶時(shí)，將凍存管從水浴中取出，噴灑 70%的乙醇，然后放在生物安全柜中。 4. 將解凍的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到提前備好的含完全培養(yǎng)基的 15ml 離心管中，1000rpm 離心 3min。 5. 丟棄上清液，并將細(xì)胞沉淀重懸于 2ml 完全培養(yǎng)基混勻，將細(xì)胞懸液緩慢添加到基質(zhì)膠包被的 6 孔板中，6 孔板的每個(gè)孔接種密度約 100 萬(wàn)個(gè)活細(xì)胞。 6. 輕輕晃動(dòng) 6 孔板使細(xì)胞均勻分布，置于 37℃，5%CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。 7. 第 2 天觀察細(xì)胞貼壁情況，更換新鮮培養(yǎng)基，此后每天更換培養(yǎng)基，直到細(xì)胞長(zhǎng)至約 85% 匯合度。 人多能干細(xì)胞傳代： 1. 將人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基及消化液提前預(yù)熱。 2. 棄掉原有培養(yǎng)基，貼壁緩慢加入 DPBS 清洗，然后沿培養(yǎng)皿邊緣吸去 DPBS 緩沖液。 3. 每孔加入 1-2ml 人多能干細(xì)胞消化液使之覆蓋皿底，并置于室溫孵育 5-8min 或在 37°C 下孵育 4-5min（消化時(shí)間依據(jù)干細(xì)胞生長(zhǎng)密度，消化時(shí)間略有不同，消化過(guò)程中可在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若在顯微鏡下觀察到大部分克隆邊緣以及克隆內(nèi)部細(xì)胞間出現(xiàn)間隙，即可吸掉消化液終止消化）。 4. 將消化液吸掉后，加入 2ml 人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基，用移液槍輕柔吹打 3~5 次，使皿底干細(xì)胞集落脫落，并將其并轉(zhuǎn)移到 15mL 離心管中，少量殘余的細(xì)胞集落沒(méi)有脫落屬于正?，F(xiàn)象。 5. 添加適當(dāng)體積的預(yù)熱完全培養(yǎng)基到基質(zhì)膠包被的 6 孔板中，將細(xì)胞懸浮液混勻后按一定比例接種至孔板中，輕輕晃動(dòng) 6 孔板使細(xì)胞均勻分布，置于 37°C、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過(guò)夜。 6. 第 2 天觀察細(xì)胞貼壁情況，更換新鮮培養(yǎng)基，此后每天更換培養(yǎng)基，直到細(xì)胞長(zhǎng)至約 85% 匯合度。 人多能干細(xì)胞凍存： 1. 將人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基及消化液提前預(yù)熱。 2. 棄掉原有培養(yǎng)基，貼壁緩慢加入 DPBS 清洗，然后沿培養(yǎng)皿邊緣吸去 DPBS 緩沖液。 3. 每孔加入 1-2ml 人多能干細(xì)胞消化液使之覆蓋皿底，并置于室溫孵育 5-8min，或在 37°C 下孵育 4-5min。 4. 將消化液吸掉后，加入 2mL 人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基，用移液槍輕柔吹打 3~5 次，使皿底干細(xì)胞集落脫落，并將其并轉(zhuǎn)移到 15mL 離心管中，1000rpm 離心 3min。 5. 棄上清，加入無(wú)血清干細(xì)胞凍存液重懸，輕輕吹打混勻，轉(zhuǎn)入到凍存管中。 6. -80℃冰箱凍存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮中長(zhǎng)期保存。 |
| 注意事項(xiàng) | 1. 人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基添加劑在室溫或 2-8℃解凍，避免反復(fù)凍融。 2. 配制好的人多能干細(xì)胞完全培養(yǎng)基可在 2°C-8°C 下儲(chǔ)存 2 周。 3. 傳代后可見(jiàn)細(xì)胞碎片和小菌落是正?，F(xiàn)象。 4. 使用本產(chǎn)品時(shí)應(yīng)嚴(yán)格按照無(wú)菌操作的規(guī)程進(jìn)行操作。 |
| 聲明 | 僅用于科研使用，不能用于臨床診斷和治療。 |
| 保存條件 |
產(chǎn)品詳情
誘導(dǎo)多能干細(xì)胞 (iPSCs) 和胚胎干細(xì)胞 (ESC)，有時(shí)統(tǒng)稱為多能干細(xì)胞 (PSC)，是一種在適當(dāng)微環(huán)境中具有無(wú)限自我更新能力和分化成幾乎任何細(xì)胞類型的細(xì)胞。這些獨(dú)特的性能使誘導(dǎo)多能干細(xì)胞和胚胎干細(xì)胞能夠應(yīng)用于疾病建模、藥物發(fā)現(xiàn)、藥物毒性測(cè)試和細(xì)胞治療。
BDBIO 人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基是一種無(wú)動(dòng)物源組分，成分完全明確的無(wú)滋養(yǎng)層培養(yǎng)基，可替代Essential 8 培養(yǎng)基，適用于胚胎和誘導(dǎo)性人多能干細(xì)胞 (PSC) 的生長(zhǎng)和擴(kuò)增。
暫無(wú)內(nèi)容...
