百迪NK細胞無血清培養(yǎng)套裝（滋養(yǎng)層細胞）Kit
- 品名： 百迪NK細胞無血清培養(yǎng)套裝（滋養(yǎng)層細胞）Kit
- 型號： S103-KIT
- 產(chǎn)品詳情
- 規(guī)格參數(shù)
產(chǎn)品信息
| 適用范圍 | 試劑 |
|---|---|
| 使用方法 | 1. 第 0 天，滅活血漿制備：采集的血樣需要在 8 小時內(nèi)分離；將抗凝血液樣本 2000rpm 離心 10min，取上層血漿移到新的離心管，56℃條件下滅活 30min，冷卻至室溫，2500rpm 離心 10min，用移液管將上清液采集至新的離心管，加入葡萄糖酸鈣，使其終濃度為 8%，保存在冰箱中，直到使用前取出。 2. 制備 PBMC，應(yīng)用不同淋巴細胞分離液可根據(jù)相關(guān)說明書操作。 3. 培養(yǎng)基的配制：免疫細胞無血清培養(yǎng)基加入重組人 IL-2 使終濃度為 200IU/ml； 4. 將試劑 A1 置于 37℃快速融化復(fù)蘇，復(fù)蘇時間不宜過長，然后用生理鹽水清洗一次，1400rpm 離心 5 分鐘之后再用 10ml 免疫細胞無血清培養(yǎng)基重懸，加入到 T75 培養(yǎng)瓶中； 5. 將制備好的 PBMC 取 2×107cells 加入 20ml 免疫細胞無血清培養(yǎng)基，再加入 1.5ml 滅活的自體血漿，加入到含有試劑 A1 的 T75 培養(yǎng)瓶中混合，置于 37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱培養(yǎng)。 6. 第 3 天將培養(yǎng)瓶中的細胞液轉(zhuǎn)移到 50ml 離心管中，1400rpm 離心 5min； 7. 吸棄上清液，收集細胞，添加 30ml 培養(yǎng)基重懸，并添加 1.5ml 自體滅活血漿，轉(zhuǎn)移回原培養(yǎng)瓶中，置于 37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱培養(yǎng)。 8. 第 4-6 天，每天觀察細胞，根據(jù)細胞懸液顏色或細胞密度（細胞濃度為 0.8-1×106/ml）添加培養(yǎng)基，每次添加體積不宜超過現(xiàn)有體積一倍。加液時按 4%、3%、2%的自體血漿加入 NK 細胞培養(yǎng)液。當(dāng)培養(yǎng)液體積大于 60mL 則轉(zhuǎn)移至 T225 瓶中培養(yǎng)，置于 37℃、5% CO2的培養(yǎng)箱培養(yǎng)。 9. 第 7 天將培養(yǎng)的 NK 細胞輕輕吹勻，進行細胞計數(shù)，將 NK 細胞轉(zhuǎn)移到細胞培養(yǎng)袋中，加培養(yǎng)基使 NK 細胞濃度在 0.8-1.0×106cells/ml，血漿按 1%添加。添加試劑 A2 (37℃復(fù)蘇，然后用生理鹽水清洗一次，1400rpm 離心 5 分鐘之后再用 20ml NK 細胞無血清培養(yǎng)基重懸后加入到細胞培養(yǎng)袋中)，置于 37℃、5% CO2的培養(yǎng)箱培養(yǎng)； 10. 第 8-11 天每天觀察或計數(shù)，根據(jù)培養(yǎng)液顏色變化或細胞濃度添加培養(yǎng)液，血漿按 1%添加使得細胞濃度在 1×106cells/ml（隨著培養(yǎng)時間推移，細胞濃度可適量增加）。 11. 當(dāng)細胞生長至所需數(shù)量時即可進行收集使用或凍存。一般情況下，12-13 天收集細胞最佳。 |
| 注意事項 | 1、 血液采集建議使用肝素鈉抗凝管或枸櫞酸鈉采血袋。 2、 自體血漿會影響細胞的培養(yǎng)狀態(tài)，建議自體血漿預(yù)留量為 30mL 左右。溶血、高脂肪可能會影響 NK 細胞的擴增。 3、 本試劑僅限用于以獲得自然殺傷細胞為目的的體外誘導(dǎo)處理，不同批次的試劑組分不能互換使用。 4、 如果試劑外包裝管出現(xiàn)裂縫，應(yīng)立即停止使用。 5、 應(yīng)嚴(yán)格按照貯存要求貯存。 6、 操作過程應(yīng)在無菌環(huán)境下進行。必須保證操作過程中使用的所有容器及所有直接接觸細胞液的器具嚴(yán)格無菌。 7、 本試劑開封后必須一次性使用完畢，不得反復(fù)凍融。 8、 為保證本試劑活性，應(yīng)嚴(yán)格按照常規(guī)細胞冷凍和復(fù)蘇的要求進行操作。細胞復(fù)蘇過程中嚴(yán)禁直接將凍存管全部浸沒在水浴內(nèi)，建議至少應(yīng)保證管蓋在水浴液面以上。 9、 細胞培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)前 7 天出現(xiàn)細胞成團屬于正?，F(xiàn)象，操作過程請注意不要破壞細胞團。 |
| 聲明 | 僅用于科研使用，不能用于臨床診斷和治療。 |
| 保存條件 |
產(chǎn)品詳情
NK 細胞無血清培養(yǎng)套裝（滋養(yǎng)層細胞）是一款專為 NK 細胞培養(yǎng)而設(shè)計的體外擴增培養(yǎng)試劑盒，用于 NK 含滋養(yǎng)層細胞的體外擴增培養(yǎng)，套裝組分包括免疫細胞無血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基、試劑 A1、試劑 A2。適用于新鮮提取的抗凝外周血或抗凝臍帶血 NK 細胞及凍存后 PBMC 中NK 細胞的體外擴增。
暫無內(nèi)容...
