- 品名： TaKaRa RNA2步法反轉(zhuǎn)錄PCR擴(kuò)增試劑盒（AMV)
- 品牌： TaKaRa
- 型號： RR019A
- 產(chǎn)品詳情
- 規(guī)格參數(shù)
商品名稱：TaKaRa RNA PCR Kit (AMV) Ver.3.0
商品編號：SPU2021050498
上架時(shí)間：2022-01-06
| ■ 制品內(nèi)容 (Code No.: RR019A : 100 次量*1) |
| AMV Reverse Transcriptase XL (5 U/μl) (Avian Myeloblastosis Virus來源)50 μlRNase Inhibitor (40 U/μl)25 μlRandom 9 mers*2 (50 pmol/μl)50 μlOligo dT-Adaptor Primer (2.5 pmol/μl)50 μlRNase Free dH2O1 mlTaKaRa Ex Taq HS (5 U/μl)25 μlM13 Primer M4*2 (20 pmol/μl)50 μl10 × RT Buffer [100 mM Tris-HCl (pH8.3)，500 mM KCl]1 ml5 × PCR Buffer1 mldNTP Mixture (各10 mM)150 μlMgCl2 (25 mM)1 mlControl R-1 Primer*2 (20 pmol/μl) (Positive Control RNA下游引物)25 μlControl F-1 Primer*2 (20 pmol/μl) (Positive Control RNA上游引物)25 μlPositive Control RNA*3 (2 × 105 copies/μl)(Transcribed poly(A)+ RNA of pSPTet3 plasmid)25 μl *1：1次反應(yīng)即10 μl RT及 50 μl PCR*2：引物序列引物名稱各引物序列Random 9 mers 5′-(P)NNNNNNNNN-3′Oligo dT-Adaptor Primer 包含dT區(qū)域及M13 Primer M4序列。Control F-1 Primer 5′-CTGCTCGCTTCGCTACTTGGA-3′Control R-1 Primer 5′-CGGCACCTGTCCTACGAGTTG-3′M13 Primer M4 5′-GTTTTCCCAGTCACGAC-3′*3：Positive Control RNA本試劑盒中的Control RNA是以pSPTet3質(zhì)粒 (質(zhì)粒中的SP6啟動子下游插入長約1.4 kb的pBR322來源的DNA片段，其DNA片段上含有抗四環(huán)素基因) 為模板由SP6 RNA聚合酶經(jīng)體外轉(zhuǎn)錄而得到的。Control RNA (約1.4 kb) 是帶有30個(gè)A堿基的具有Poly(A)+ 尾的RNA。當(dāng)把Control RNA經(jīng)RT-PCR合成的雙鏈cDNA插入質(zhì)粒時(shí)，該質(zhì)粒便可獲得四環(huán)素抗性。Control RNA簡圖見圖1。圖1. Positive Control RNA：使用各種引物所能擴(kuò)增的DNA片段 |
| ■ 制品說明 |
| PCR (Polymerase Chain Reaction；聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)) 是一種體外擴(kuò)增DNA的簡單而有效的方法。雖然原理上PCR法是擴(kuò)增DNA，RNA不能直接被擴(kuò)增，但是經(jīng)過反轉(zhuǎn)錄酶的作用把RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA后，PCR法便可應(yīng)用于RNA的解析了。目前，此方法已廣泛應(yīng)用于RNA的構(gòu)造解析、cDNA的克隆及RNA水平上的表達(dá)解析等多種領(lǐng)域。TaKaRa RNA PCR Kit Ver.3.0是使用AMV (Avian Myeloblastosis Virus) 由來的反轉(zhuǎn)錄酶將RNA合成cDNA，然后在同一反應(yīng)管中使用Hot Start PCR用TaKaRa Ex Taq HS DNA聚合酶擴(kuò)增此cDNA的RT-PCR試劑盒。本試劑盒含有從RNA到cDNA，然后使用PCR法擴(kuò)增此cDNA所需的全部試劑，可實(shí)現(xiàn)簡單高效的RNA分析。本試劑盒中的Oligo dT-Adaptor Primer的特殊設(shè)計(jì)，大大地提高了Poly(A)+ RNA 3′端區(qū)域的cDNA合成效率。Hot Start PCR用DNA聚合酶TaKaRa Ex Taq HS的應(yīng)用，避免擴(kuò)增前由于錯(cuò)配或引物二聚體產(chǎn)生的非特異性擴(kuò)增。 ■ 保存 |
| -20℃。 |
| ■ RNA LA PCR的原理 |
| 本試劑盒使用AMV由來的反轉(zhuǎn)錄酶由RNA合成cDNA，并可在同一反應(yīng)管中使用TaKaRa Ex Taq HS擴(kuò)增此cDNA。Random 9 mers、Oligo dT-Adaptor Primer或特異性下游引物等均可作為反轉(zhuǎn)錄引物用于cDNA合成。Oligo dT-Adaptor Primer同時(shí)適用于3′-RACE實(shí)驗(yàn)。 |
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| 圖2. RNA PCR的原理 |
| ■ 特點(diǎn) |
| RNA模板 適用于所有RNA擴(kuò)增片段大小 ≤5 kb反轉(zhuǎn)錄酶 AMV Reverse Transcriptase XLDNA Polymerase TaKaRa Ex Taq HSRNase Inhibitor 必須使用 (Kit中含有)合成第一條cDNA鏈的引物 Random 9 mers、Oligo dT-Adaptor Primer或 特異性下游PCR Primer 可供選擇3′-RACE法 RT反應(yīng)時(shí)使用Oligo dT-Adaptor Primer，PCR反應(yīng)時(shí)下游引物使用M13 Primer M4操 作 在同一反應(yīng)管中進(jìn)行 (反轉(zhuǎn)錄酶在進(jìn)行PCR反應(yīng)前須進(jìn)行高溫失活) |
| ■ 反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)時(shí)Primer的選擇 |
| Random 9 mers 適用于長的或具有Hairpin構(gòu)造的RNA。包括rRNA、mRNA、tRNA等在內(nèi)的所有RNA的反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)都可使用本引物。 用Random 9 mers合成的cDNA進(jìn)行PCR反應(yīng)時(shí)，必須使用特異性引物。Oligo dT-Adaptor Primer 適用于具有Poly(A)+ Tail的RNA。(注意：原核生物的RNA、真核生物 Primer 的rRNA及tRNA以及某些種類的真核生物的mRNA不具有Poly (A)+ Tail)。 本Primer設(shè)計(jì)巧妙，反轉(zhuǎn)錄效率高。反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)后，可用M13 Primer M4進(jìn)行3′-RACE實(shí)驗(yàn)。特異性下游PCR Primer(PCR時(shí)的下游引物) 因其必須與模板序列互補(bǔ)，所以只適用于Target序列已知的情況。 |
| ■ 注意事項(xiàng) |
| 1. 當(dāng)同時(shí)需要進(jìn)行數(shù)次反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)或PCR反應(yīng)時(shí)，應(yīng)先配制各種試劑的混合液 (Master Mix；其中包括RNase Free dH2O、Buffer、dNTP Mixture、MgCl2等)，然后再分裝到每個(gè)反應(yīng)管中。這樣，可使所取的試劑體積更準(zhǔn)確，減少試劑損失，避免重復(fù)分取同一試劑。同時(shí)也可以減少實(shí)驗(yàn)操作或?qū)嶒?yàn)之間產(chǎn)生的誤差。 2. 使用Reverse Transcriptase、RNase Inhibitor、TaKaRa LA Taq 酶等酶類時(shí)，應(yīng)輕輕混勻，避免起泡；分取之前要小心地離心收集到反應(yīng)管底部；由于酶保存液粘度高，分取時(shí)應(yīng)慢慢吸取。 3. 酶制品應(yīng)在實(shí)驗(yàn)前才從-20℃中取出，使用后也應(yīng)立即放回-20℃中保存。 4. 分裝試劑時(shí)務(wù)必使用新的槍頭 (Tip)，以防止樣品間污染。 5. 最佳的PCR條件，因PCR擴(kuò)增儀的不同而不同，所以在使用您的樣品之前最好先試做一下Control反應(yīng)，以確定最佳的PCR條件。 |
| TaKaRaRNAPCRKit(AMV)Ver.3.0 | |||
| 品牌 | CodeNo. | 產(chǎn)品名稱 | 包裝量 |
| Takara | RR019A | TaKaRaRNAPCRKit(AMV)Ver.3.0 | 100次 |
| Takara | RR019B(A×2) | TaKaRaRNAPCRKit(AMV)Ver.3.0 | 200次 |
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