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免疫親和柱利用抗原抗體特異性可逆結(jié)合的原理，將毒素杭體與凝膠共價結(jié)合，然后填充柱子。將樣品提取溶液過 免疫親和柱，與抗體分子有特異性結(jié)合的黃曲霉毒素被固定，而非目標(biāo)化合物則沿柱流出，再用甲醇將黃曲霉毒素洗脫，根據(jù)待測物分子熒光特性， 用高效液相色譜或?qū)Ｓ枚繜晒馑贉y儀進(jìn)行定量檢測。
????黃曲霉毒素??????????????赫曲毒素????????????玉米赤霉烯酮?????????嘔吐毒素
????Aflatoxin B1????????????Ochratoxin A???????????Zear alenone???????Deoxynivalenol
一，樣品制備
參考《GB 5009.22-2016食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中黃曲霉鑿素B族和G族的測定》。
1, 均質(zhì)
準(zhǔn)確稱取20.0g粉碎的樣品，加入100ml 70％甲醇 水（體積比）混勻，以均質(zhì)器高速攪拌提取2min或振蕩提取30min;
2, 提取
提取液用玻璃纖維濾紙過濾或5000r/min離心Smin，取10ml濾液加入20ml水稀釋，混勻；
3, 過濾
用快速定性濾紙或玻璃微纖維濾紙或定量濾紙過濾，收集濾液，取15ml
注意：對千樣品提取液(pH<6或pH>8)的樣品， 需調(diào)節(jié)pH至中性， 并用玻璃微纖維濾紙／定量濾紙過濾； 對千渾濁難過濾的樣品， 可用離心機(jī)離心使其分層
二, 樣品凈化
注意：整個純化過程盡量不要讓柱子液體流干！
（1）取出免疫親和層析微柱，將上方塞子取出剪斷， 再插回親和柱上
（2）將柱子與泵流操作架上的玻璃針筒連接固定，去掉親和柱下方堵頭，用15ml水或pH7.4磷酸鹽緩沖溶液(PBS)洗滌1次，流速1.5ml/min;
（3）將處理后的溶液上樣， 使 液體以1.5 ml/min的速度流出；
（4）用15ml水或pH7.4磷酸鹽緩沖溶液(PBS)洗滌2次，流速1.5ml/min, 直至2~3mL空氣通過柱體，保證柱子內(nèi)沒有殘余液體
（5）用1ml甲醇洗脫，用樣品瓶／玻璃試管接洗脫液， 流速1ml/min;
（6）脫后液體可用于檢測。
＊每盒產(chǎn)品內(nèi)附產(chǎn)品使用說明
一，注意事項
（1）黃曲霉毒素對人體有害，應(yīng)戴手套操作。凡接觸到標(biāo)樣的玻璃器皿都要用5％次氯酸鈉浸泡過夜。
（2）不要使用過有效期的免疫親和柱。
（3）免疫親和柱應(yīng)在2~8它保存，不要冷凍。
（4） 使用前，免疫親和柱需至少提前半小時回溫至室溫(25℃左右）。
（5）樣本AFB1含量高千柱容量時，需適當(dāng)降低上樣體積。
（6）必須保證過柱的樣品提取液pH在6~8之間，可用鹽酸或氫氧化鈉調(diào)整。
（7）稱取的樣品量以及提取液的體積可根據(jù)實際情況按比例調(diào)整，建議最低不少于1
保質(zhì)期
（1）4℃下保存期可長達(dá)兩年；
（2）生產(chǎn)日期見外包裝盒
測定條件 |  |
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